Guía de Cuantificación Digital con ImageJ / Fiji (Normalización BSA)
Este protocolo estandariza la transformación de observaciones visuales cualitativas en datos semi-cuantitativos robustos, eliminando la subjetividad del análisis visual.
Esta metodología es universal para:
El software necesita interpretar "brillo" como "cantidad".
Causa: Seleccionar solo la banda pequeña ("el cuadrito") en lugar de definir el contexto del carril.
Solución: La herramienta de selección debe abarcar desde el inicio superior hasta el final inferior del gel verticalmente, cubriendo todo el camino por donde corrió la muestra.
Seleccione la herramienta Rectángulo ⬜ en la barra.
Dibuje un rectángulo largo y vertical que encierre TODO el primer carril (desde el pozo hasta el frente).
Con el rectángulo seleccionado sobre la primera muestra, vaya al menú:
(Alternativa: Tecla Ctrl + 1)
Aparecerá un número "1" dentro del recuadro.
¡No dibuje de nuevo! Mueva el recuadro existente hacia la derecha usando:
🖱️ Arrastrando con el mouse (clic al centro).
⌨️ Usando las Flechas del Teclado ← → (Recomendado para mantener la misma altura).
Una vez posicionado, vaya a:
(Alternativa: Ctrl + 2)
Cuando todos los carriles estén numerados, finalice el proceso:
(Alternativa: Ctrl + 3)
Aísle la señal de la proteína cerrando la base de la "montaña" gráfica.